|
6.各种检验标本的采集技术
|
| （一）动物血液采集技术 实验动物的采血方法较多，按采血部位不同可分为：穿刺采血法（含剪、割法）、断头采血法、心脏采血法、颈动（静）脉采血法、腹主动脉采血法、股动脉采血法、耳静脉采血法等。不同动物采血部位与采血量的关系见表1。 1.穿刺采血 当所需采血量较少，或仅用于涂玻片检查红、自细胞数时多采用此方法。大鼠、小鼠的穿刺部位多在尾部和眼眶静脉丛。尾部穿刺时，用7号针头刺入尾静脉，拨出针头后，即有血滴出。若反复采血，可由尾远心端向近心端逐步穿刺（或剪断尾部）。眼眶静脉丛采血时，在左手保定的同时，压迫其颈部两侧，使眶后静脉丛充血，用7号针头（连接1ml的注射器）或者用长玻璃管（φ0.5～1mm）直接接入试管中。针头或玻璃管与鼠眼球侧面成45°，由眼内角刺入（针头斜面向眼球）后转180°。大鼠刺入深度4～5mm, 小鼠2～3mm, 当剌入后感到有阻力时停止推进，同时退针0.1～0.5mm, 边抽边退。采完后拨出针头或玻璃管，同时撤去颈部的压力，消毒穿刺孔即可。 豚鼠的穿刺法可改为耳缘剪口采血。消毒耳缘后，用二甲苯反复擦拭耳缘使血管充分充盈，然后用刀片或剪刀割（剪）破耳缘血管，抗凝血应在耳缘切口处涂20%拧檬酸纳液。此法采0.5ml血左右。 犬、羊、兔等动物穿刺方法采血同豚鼠相似。穿刺采血时应准确、迅速刺破血管，注意不可反复地戳刺同一针孔。穿刺时应注意无菌操作。表1：
2.断头采血法 该方法是用利器（术剪或刀片）断离头颈部一次性采血，适用于大鼠、小鼠。采血时操作者左手拇、食指握住大、小鼠颈部，头部朝下，用利剪在鼠颈头间1/2处剪断，让血液自 由滴落在试管中，小鼠可采1ml左右，大鼠可采10ml左右。断头采血法所获血液中混有少量组织液，有时还混有被毛，极易被污染。采血时应注意防止污染。 3.心脏采血 该方法是用注射针头剌入心腔采血，多用于兔、犬等中动物。小动物因心脏搏动很快，心腔小，位置较难固定而较少使用。 采血时，用指尖探明心搏动最明显之处进针。针头宜长些。进针角度与胸部垂直，刺入胸腔后，仔细感觉针尖随心搏动在动，如将注射器抽成负压，血液可自动流入注射器。心脏采血时动作应迅速，缩短留针时间以防止血液凝固，若针头已刺入心腔但又抽不出血时，应将针头稍微轴向转动一下或稍后退一点，切不可使针头在心脏内横向摆动。 心脏采血时应麻醉动物局部消毒后再进行。采血针头的使用型号一般是：犬6号半、兔6号、豚鼠5号、小鼠4号、猫6号。 4.颈动（静）脉采血 是一种采血量大，血液不容易被污染，操作方便的一种采血方法，适用于各种动物。采血前将动物麻醉保定后，暴露颈部皮肤，按局部无菌法要求做颈侧皮肤切开，分离出颈动（静）脉，视所需血量可用注射器制取或直接结扎远（近）端，用试管直接接取血液。另外，非开放性颈动（静）脉采血法适用于中动物。采血时，局部剪毛、消毒后，用左手压迫颈部观察血充盈部位，确定穿刺点，右手持注射器，用6号半针头沿血管平行方向刺入血管。由于皮肤易滑动，进针时可先刺入皮肤再对准血管垂直刺入。刺入后宜将针头轴向旋转，抽动注射器，血液即流入注射器内。采血后用碘酊棉球压迫针孔止血。 5.腹主动脉采血与股动脉采血 该类方法与开放式颈动脉采血相似，犬多用股动脉采血法。腹主动脉采血时，保定麻醉好动物，切开腹腔暴露出腹主动脉，其术式同颈动脉采血法。股动脉采血时，将动物仰卧于实验台上，伸展后肢保定，暴露出腹股沟三角动脉搏动部位，剪毛，消毒使用5号半针头的注射器，直接刺入血管内，刺入后可见血液流入注射器内。采完后迅速拨出针头，用碘酊棉球压迫止血几分钟。 6.耳静脉采血法 该方法多用于兔等中量采血，操作方便，安全，可反复采血。采血时，将兔保定于固定盒内，或由助手保定，选静脉较粗、清晰的耳朵拨去被毛，消毒，为使血管扩张，可用手指揉搓血管局部，或用二甲苯涂擦。用5号半针头沿耳缘静脉远端（末稍端）刺入血管，静脉采血时应逆血流方向进针，取血后酒精棉球压迫止血。此法一般可采血5～10ml。耳部采血也可选耳中央动脉，兔耳中央有一条或两条较粗、颜色较鲜红的动脉，刺入方向应朝近心端。由于兔耳中央动脉在受剌激时有痉挛反应，因此刺入血管后稍等片刻或在痉挛前迅速抽血。取血针头应用稍大一些，一般用6号针头。耳动脉采血部位应从中央动脉末端开始，不要在近耳根部进针，因其耳根部组织较厚，血管不清晰。 禽类采血常在翼根静脉部位。采血时暴露腋窝，拨去羽毛，可见明显的翼根血管。消毒后，用5号半针头注射器沿远心端方向刺入，即可抽出血液。禽右翼根静脉比左侧略粗，故多在右侧采血。 （二）动物体内各种液体的采集技术 1.胸、腹水的采集 （1）胸水的采集。实验动物的胸水采集主要利用胸膜腔穿刺术。先准备好普通注射针头、穿胸套管针、注射器等器械。大、中动物应麻醉，小动物应侧卧保定。术部剪毛消毒后，左手将术部皮肤向侧方移动，右手持穿刺套管针，在紧靠肋骨前缘处垂直皮肤慢慢刺入，穿刺肋间肌时产生一定阻力，当阻力消失有针落空感时，表明刺入胸膜腔，即可抽取胸水。穿刺部位：犬在左侧第八肋间或右侧第七肋间；羊在左侧第六或第七肋间或右侧在第五或第六肋间。穿刺时应避免损伤肋间血管和神经。 （2）腹水的采集。腹水的采集主要利用腹膜腔穿刺术。动物取立位保定。穿刺点在腹下剑状软骨后方，旁开正中线，小动物在脐稍后方正中线上或正中线侧方1～2cm处。穿刺时，先将穿刺部位剪毛消毒，再将皮肤稍向一侧移动，用注射器或穿刺套管针与腹壁垂直刺入。针尖有落空感后，腹水将自行流出。如若腹水量较大的，应缓慢地间歇地放出，以免腹内压突然下降而致使动物发生循环功能障碍。采完腹水后用碘酊棉球涂布。 2.消化液的采集 动物消化液主要有唾液、胃液、胆汁、胰液等。 （1）唾液的采集。动物的唾液采集一般采用剌激法。通过食物的颜色、气味等剌激动物的视觉、嗅觉而致动物唾液分泌增加，再通过引入导管采集。 （2）胃液的采集。胃液的采集同样通过剌激，使胃液分泌增加，再用插胃管的办法抽取胃液。 （3）胆汁的采取。胆汁的采集需要手术进行。将动物麻醉后仰卧于实验台上，自剑突下及正中线做 3～5cm的切口，切开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，找出胆囊（十二指肠与胃交界处，有一暗绿色的囊，注意大鼠没有胆囊而由几根肝管汇集成肝总管并和胰管一起汇成胆总管，开口于十二指肠），并分离出胆囊或胆总管，再用注射器抽取胆汁。 （4）胰液的采集。基本方法同胆汁的采集。在胆总管和十二指肠交界处分离出胆总管，小心操作勿剌激胰腺，以免影响胰液分泌。分离后在靠肠端结扎，作为牵引线，用眼科剪在管壁上斜开一小口，插入准备好的胰液收集管（一般用聚乙烯塑料软管，内径2mm, 长10cm, 并将其拉成内径0.05mm的细管，剪成一端斜口，在粗细交界处绕3～4圈，用0号缝合线）插入小口内，并用容器收集胰液。 3.动物尿液采集 动物尿液常用代谢笼采集，也可通过其他装置来采集。在没有上述设备的情况下，可采用导尿法、穿刺法采集。 （1）导尿法采集。用导尿管插入尿道，在消毒和无菌操作情况下，可采到无污染的尿液。或者将动物麻醉后，使膀胱和尿道括约肌松弛，再插入导尿管收集尿液。 （2）膀胱穿刺采尿。将动物麻醉后，仰卧于实验台上保定，剪毛消毒后用注射器接长针头直接插入膀胱采集尿液。穿刺点在耻骨前腹正中线，应避开乳房（阴茎）。剖腹采尿时，皮肤切口应在乳房（阴茎）侧方。闭合腹腔时，用丝线对腹膜行连续缝合，腹直肌、鞘膜用结节缝合，皮下创口用肠线行结节缝合，皮肤用丝线行结节缝合。 4.动物骨髓采集 大动物骨髓的采集通常用活体穿刺法，多为胸骨、肋骨、股骨等骨的骨髓。小动物因骨髓小，不易穿刺采集，多用处死后采集的办法，一般采集胸骨和股骨骨髓。 5.动物精液采集 动物精液的采集常用假阴道诱精法，适用于中型以上动物。小动物则常在雌雄交配后24小时内，在雌性动物生殖道内可收集到透明的阴道栓，可通过阴道栓涂片染色观察凝固的精液。 采集精液是动物生产和科研工作的常用方法，这里对兔的采精方法加以介绍： （1）器材。假阴道由内外胎和集精瓶组成。外壳用塑质软管制成，内径为2cm, 管长6～7cm。内胎可选用人用避孕套（使用前应消毒），集精瓶可用青霉素瓶代替。装配时先将避孕套的前端剪一小孔放入外壳内，并将其翻在两端的外壳边缘上，固定。再将青霉素瓶插入外壳一端，另一端做采精用。 （2）采精方法。先装好假阴道，将45℃左右的热水通过外壳旁的小孔灌入假阴道，使内胎膨胀，突出假阴道，然后用干净的手指伸入其内，既有温感和弹性，又有一定压力。假阴道口再涂上凡士林做润滑剂。采精时，一手握住假阴道，另一手用兔反盖在握假阴道的手背上，然后伸向雄性兔生殖器，此时应注意假阴道的进口高度，使雄兔阴茎正好插入。一旦雄兔阴茎插入阴道后，并发出"咕咕"叫声，立即倒下时，则证明兔射精完毕。应马上拆下采精瓶，并将精液倒入有刻度的干燥离心管内，迅速做有关检查。 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
---摘自《实验动物学技术》
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||